Введение
Вирусы гриппа относятся к семейству ортомиксовирусов, имеют сегментированный геном и подразделяются на типы А, В и С. Существующая классификация вирусов гриппа типа А, к которому относят вирус «птичьего» гриппа, основана на характеристике их антигенных свойств, определяемых поверхностными антигенными детерминантами гемагглютинином (H) и нейраминидазой (N). Вирусы гриппа, имеющие в своем геноме гемагглютинин 5 или 7 типа, содержащий специфический локус патогенности, способны вызывать массовую гибель птиц, и в ряде случаев тяжелые заболевания у людей, сопровождающиеся высокой летальностью.

Эпидемиология
Впервые случаи заражения людей вирусом гриппа А субтипа H5N1 c 50% летальным исходом было зарегистрировано в 1997 г при эпизоотии в Гонконге. В 2003-2004 гг. вирус гриппа птиц H5N1 снова получил широкое распространение в странах Юго-Восточной Азии, а в 2005-2006 гг. в ряде регионов нашей страны, стран СНГ и Европы. По данным Всемирной организации здравоохранения с 2003 г. по 8 августа 2006 года во Вьетнаме, Индонезии, Китае, Таиланде, Камбодже, Турции, Египте, Ираке, Джибути и Азербайджане было выявлено и лабораторно подтверждено 235 случаев заболевания людей, из которых 137 человек погибло. Все случаи заражения произошли в результате близкого контакта с инфицированной домашней птицей.

Способность штаммов гриппа H5N1 инфицировать человека зависит от наличия определенных аминокислот в участках гемагглютинина, взаимодействующих с рецепторами дыхательных путей. По этой причине циркулировавшие штаммы гриппа H5N1 не были способны с высокой эффективностью инфицировать людей, что обусловило невысокий процент заболевших и отсутствие зарегистрированных случаев передачи вируса от человека к человеку. Опасения вызывает возможность появления у данного штамма способности к высокоэффективному инфицированию человека и развития пандемии гриппа крайне тяжелого течения. Контроль над циркуляцией штаммов гриппа А Н5 среди животных, а также выявление заболевания у лиц из групп риска невозможно без использования высокочувствительных, специфичных и быстрых в проведении методик лабораторной диагностики этого заболевания.

Лабораторная диагностика
В соответствии с рекомендациями ВОЗ, для диагностики гриппа, вызванного штаммом H5N1 должна проводиться изоляция вируса с последующим серотипированием в реакции торможения гемагглютинации и методом ингибирования нейраминидазной активности c использованием типоспецифических сывороток либо реакция иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к гриппу А Н5 (WHO Infl _ Reagent kit 97_98, 2003, 2004), а также ПЦР с амплификацией участка гена гемагглютинина, специфичного для А Н5 и нейраминидазы N1 c последующим секвенированием фрагментов ПЦР вследствие невысокой специфичности рекомендованных праймеров.

Широкое применение на практике методов изоляции вируса с последующим серотипированием затруднено малым количеством вирусологических лабораторий и трудоемкостью методик. Кроме того, работы связанные с культивированием вируса гриппа птиц, из-за высокого риска рекомбинаций запрещено производить в лабораториях, работающих со штаммами гриппа человека. Реакция иммуно-флуоресценции рекомендована для экспресс диагностики, но требует дополнительного подтверждения вследствие наличия перекрестных реакций при применении тест-систем для выявления гриппа А Н1 со штаммами А Н5.

Метод ПЦР объединяет лучшие качества перечисленных методик, позволяя в короткий промежуток времени с использованием коммерчески доступных технологий получать достоверный и информативный результат исследования. В связи с необходимостью разработки отечественной диагностической системы для выявления вируса гриппа А Н5 специалистами ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора была разработана тест-система «АмплиСенс® Infl uenza virus H5N1», предназначенная для выявления РНК вируса гриппа А и идентификации субтипа Н5N1 методом обратной транскрипции (ОТ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.

Наборы реагентов для выявления РНК вируса гриппа А субтипа H5N1 методом полимеразной цепной реакции

Преимущества наборов реагентов Influenza virus H5N1

• Внутренний контроль позволяет контролировать все этапы анализа, включая этап выделения РНК, обратной транскрипции и ПЦР.
• Доказанная диагностическая чувствительность во время эпизоотии 2005-2006 года.

Материал для исследования:

Варианты наборов реагентов

Аналитические характеристики
Примеры работы. Формат FRT

Выявление вирусов гриппа А

Идентификация субтипа H5N1 гриппа А

Рекомендуемое оборудование
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции Rotor-Gene Q, производства Corbett Research, Австралия


Примеры работы. Формат FEP

Выявление вирусов гриппа А

Идентификация субтипа H5N1 гриппа А

Рекомендуемое оборудование
Анализатор автоматический люминесцентный мультиканальный АЛА 1/4, производства «SIA BioSan», Республика Латвия

Результаты клинических испытаний
Во время эпизоотии гриппа птиц 2005-2006 гг. в России и странах СНГ набор реагентов был апробирован на биологическом материале с оценкой диагностической чувствительности. 46 образцов биологического материала от птиц из Сибирского федерального округа были параллельно исследованы методом ПЦР и с помощью изоляции вируса с последующим серотипированием. Оба метода показали одинаковые результаты (вирус гриппа А H5N1 был обнаружен в 27 образцах), таким образом, диагностическая чувствительность составила 100%. Набор реагентов был апробирован в общей сложности на 1751 образце от птиц из пораженных и свободных от эпизоотии регионов. РНК вируса гриппа А H5N1 была обнаружена в 208 образцах (в материале из частных хозяйств и Махачкалинской птицефабрики), в 1543 образцах (из государственных птицефабрик регионов РФ) вирус гриппа не был обнаружен.