ВИЧ-инфекция - инфекционное заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека, характеризующееся многолетним течением, клинически связанным с прогрессирующим снижением иммунитета, приводящим на последней стадии заболевания к синдрому приобретенного иммунодефицита (СПИД), для которого характерно развитие тяжелых форм оппортунистических заболеваний.
Диагностика ВИЧ-инфекции осуществляется путем комплексной оценки эпидемиологических данных, результатов клинического обследования и лабораторных исследований. Решающее значение в постановке диагноза играет лабораторная диагностика, которая заключается в обнаружении антител к ВИЧ в крови с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с последующим подтверждением положительных результатов методом иммуноблоттинга (ИБ). Такой метод диагностики позволяет выявлять ВИЧ-инфицированных лиц с эффективностью 99%. Однако, серологическая диагностика неэффективна в период т.н. «серологического окна», когда в первые недели после заражения антитела к ВИЧ не могут быть выявлены методом ИФА по причине их отсутствия или низкой концентрации. Эффективность диагностики путем выявления антител к ВИЧ снижается до нуля при исследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, т.к. у неинфицированных детей антитела к ВИЧ могут присутствовать в крови в течение продолжительного времени после рождения (до года и более).
Недостатком серологической диагностики являются также ложноположительные результаты, из-за чего для уточнения диагноза требуется подтверждающий тест - ИБ, который отличается большей специфичностью и достаточно высокой стоимостью (около 20-40$). Метод ИБ также может давать сомнительные результаты (в 4-20% случаев). Это приводит к удорожанию диагностики и отсрочке постановки диагноза.
Одним из наиболее эффективных методов прямого выявления ВИЧ в настоящее время считают специфическую амплификацию нуклеиновых кислот in vitro, в частности — метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Преимуществ у данного метода много. Во-первых, выявление ДНК/РНК вируса позволяет уменьшить продолжительность «серологического окна» в среднем на 11 дней. Во-вторых, низкая стоимость отечественных ПЦР-тестов (3-5$) является оптимальным решением для расшифровки сомнительных результатов ИБ, а в последующем, возможно, полной замены дорогостоящего метода ИБ. В-третьих, метод ПЦР стал незаменимым подходом для диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
наверх
Несмотря на то, что дети подвергаются высокому риску заражения ВИЧ внутриутробно, во время родов и при кормлении грудью, далеко не каждый ребенок, рожденный инфицированной женщиной, заражен ВИЧ. При отсутствии профилактических мер риск передачи ВИЧ от матери ребенку, находящемуся на искусственном вскармливании, составляет 15-30%; грудное вскармливание повышает риск до 20-45%. На сегодняшний день разработаны эффективные методы профилактики вертикальной передачи ВИЧ: антиретровирусная терапия, которая проводится матери во время беременности и родов и ребенку в первые недели жизни; акушерские вмешательства, включая плановое кесарево сечение; отказ от грудного вскармливания. Там, где эти методы доступны и применяются, частоту передачи ВИЧ от матери ребенку удается снизить до 1-2%.
Диагностика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, затруднена тем, что до 15-18 месяцев жизни у них обнаруживаются материнские антитела ВИЧ, не позволяющие провести достоверную диагностику серологическими методами. По существующим в России рекомендациям постановка или снятие диагноза ВИЧ-инфекции детям, рожденным от ВИЧ-инфицированных матерей, проводится на основании результатов серологического обследования в возрасте не ранее 18 месяцев.
Проблема более ранней диагностики ВИЧ-инфекции у новорожденных детей была решена с появлением молекулярно-генетических методов, позволяющих выявлять фрагменты генома ВИЧ в периферической крови на ранних сроках инфицирования. Было показано, что у большинства инфицированных детей провирусная ДНК ВИЧ определяется к 1 месяцу жизни и практически у всех - к 6 месяцу. На основании этих данных рекомендуется провести ПЦР на ДНК провируса ВИЧ в течение 48 часов после рождения. Пуповинная кровь для исследования не пригодна из-за возможного содержания в ней материнской крови. Второе исследование на ДНК провируса ВИЧ проводят на 6-8-й неделе жизни ребенка независимо от результата первого исследования. Окончательный вывод о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции делают не позднее 6 месяца жизни ребенка.
Информация для заказа:
| Название | Особенности | Тестов |
Аналитическая
чувствительность, копий/мл Кат. № АмплиСенс®
ДНК-ВИЧ-FLсодержит «РИБО-преп» и «Гемолитик» для выделения ДНК из цельной крови100100TR-V0-G-P1
(RG,iQ,Mx,Dt)
содержит «ДНК-сорб-В» и «Гемолитик» для выделения ДНК из цельной крови100250TR-V0-G-S
(RG,iQ,Mx,Dt) содержит карты WATMAN для фиксации образцов сухой крови и реагенты для выделения ДНК из сухих пятен крови1001000TR-V0-G-P2
(RG,iQ,Mx,Dt)
навер
Скрининг донорской крови с помощью только серологических методов (ИФА) не позволяет предотвратить передачу ВИЧ-инфекции при переливании крови при наличии у донора инфекции в фазе «серологического окна». В США и странах Западной Европы с 1999 г для тестирования инфекционной безопасности донорской крови используются молекулярно-генетические методы. С 2008 года в РФ регламентировано использование метода ПЦР для тестирования донорской крови.
Набор реагентов АмплиСенсÒHCV/HBV/HIV-FL был разработан специально для обеспечения биологической безопасности при переливании крови, трансплантациях и производстве препаратов, содержащих компоненты крови. Рекомендуемым материалом для исследования являются образцы плазмы крови и их пулы. Возможно проведение анализа других видов клинического материала (сыворотка, компоненты крови, биоптаты).
Набор реагентов «АмплиСенс® HCV/HBV/HIV-FL» можно использовать для исследования негативной по результатам ИФА-анализа плазмы и для разрешения сомнительных результатов серологического тестирования. Для уменьшения стоимости анализа и увеличения пропускной способности лаборатории, предлагается объединять образцы плазмы в мини-пулы из 4 до 10 образцов с общим объемом 1000 мкл.
Аналитические характеристики набора АмплиСенс® HCV/HBV/HIV-FL:
| Объём экстракции, мкл | Аналитическая чувствительность |
| HCV, ME/мл | HBV, ME/мл | HIV-1, копий/мл | HIV-2, копий/мл |
| 100 | 100 | 50 | 200 | 600 |
| 200 | 50 | 25 | 100 | 300 |
| 1000 | 10 | 5 | 20 | 60 |
Информация для заказа:
| Название | Особенности | Тестов | Кат. № |
| АмплиСенс® HCV/HBV/HIV-FL | для выявления HBV, HCV, HIV1 и HIV2; содержит набор «МАГНО-сорб» для выделения ДНК и РНК из 1000 мкл плазмы крови | 100 | TR-V62-Ms (RG,Dt) |
| для выявления HBV, HCV, HIV1 и HIV2 | 100 | R-V62 (RG,Dt) |
| для выявления HBV, HCV и HIV1 | 100 | R-V50-4x (RG,iQ,Mx,Dt)
|
наверх
Количественное определение РНК ВИЧ в плазме крови (определение вирусной нагрузки) - обязательная процедура, которая проводится при постановке диагноза ВИЧ-инфекции, а также на этапе назначения противовирусной терапии и дальнейшего мониторинга эффективности терапии.
Вирусная нагрузка - самый ранний показатель успеха или неудачи лечения, который почти на месяц опережает изменение числа лимфоцитов CD4. Статистически значимым изменением вирусной нагрузки считают изменение более чем в 3 раза или более чем на 0,5 lg. Первое исследование на вирусную нагрузку после начала терапии необходимо провести через 4-8 недель. Вирусологическими критериями эффективности терапии считают снижение вирусной нагрузки более чем на 0,5 lg через 4 недели и более чем на 1 lg через 8 недель лечения. Если вирусная нагрузка не снизилась до уровня менее 400 копий/мл к 24-й неделе лечения или до уровня менее 50 копий/мл к 48-й неделе лечения, это указывает на неполноценный ответ.
Если вирусная нагрузка однажды снизилась до неопределяемого уровня, а затем проведенное дважды измерение с интервалом 4-8 недель показало, что она вновь возросла до определяемых значений, существует риск вирусологической неэффективности лечения. Чаще всего это свидетельствует о развитии лекарственной устойчивости ВИЧ и требует скорейшего изменения схемы лечения. Небольшие подъемы вирусной нагрузки от неопределяемого уровня до 50-200 копий/мл («всплески») могут регистрироваться и без развития устойчивых штаммов вируса, но, тем не менее, это должно стать поводом для обсуждения с пациентом вопросов соблюдения режима лечения.
Информация для заказа:
| Название | Особенности | Тестов | Кат.№ |
АмплиСенс®
ВИЧ-Монитор-FRT
| содержит набор «РИБО-сорб» для выделения РНК из 100 мкл плазмы крови | 48 | ТR-V0-S-M(RG,iQ,Мх,Dt) |
| содержит набор «РИБО-преп» для выделения РНК из 100 мкл плазмы крови | 48 | TR-V0-P-M(RG,iQ,Mx,Dt) |
| содержит набор «МАГНО-сорб» для выделения РНК из 1000 мкл плазмы крови | 100 | TR-V0-M-M(RG,iQ,Mx,Dt) |
| форма комплектации для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот; не содержит набор для выделения РНК | 80 | R-V0-MC(RG,iQ,Mx,Dt) |
наверх
Лекарственная устойчивость ВИЧ
Определение лекарственной устойчивости ВИЧ необходимо для организации максимально экономичной и эффективной терапии для ВИЧ-инфицированных. В практической диагностике наиболее широко используется генотипический подход к определению лекарственной устойчивости ВИЧ, который основан на методе секвенирования ДНК. Генотипическими тестами определяют нуклеотидную последовательность вируса в выбранных фрагментах генома и с помощью «виртуального фенотипирования», т.е. через сопоставление анапизируемой нуклеотидной последовательности вируса с нуклеотидными последовательностями, представленными в базах данных, выявляют мутации лекарственной устойчивости, и опредепяют чувствительность вируса к антиретровирусным препаратам.
наверх
Применение антиретровирусной терапии в лечении ВИЧ-инфекции значительно повысило качество и продолжительность жизни ВИЧ-инфицированных пациентов. Основной принцип действия антиретровирусной терапии - направленное ингибирование основных этапов жизненного цикла ВИЧ. Антиретровирусные препараты группируются по классам в зависимости от того, на каком этапе жизненного цикла вируса они действуют. Для лечения ВИЧ-инфекции наиболее часто используются препараты, относящиеся к классам ингибиторов протеазы и ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ. Третьей ферментативной мишенью антиретровирусной терапии является интеграза ВИЧ. Кроме вышеуказанных классов в России зарегистрированы также ингибиторы интегразы и ингибиторы слияния. При лечении ВИЧ-инфекции антиретровирусные препараты назначаются согласно определенным схемам. В каждую схему входят препараты нескольких классов.
Со временем у значительной части пациентов применяемая схема антиретровирусной терапии становится неэффективной, и одной из основных причин является развитие устойчивости ВИЧ к используемым препаратам.
Для определения лекарственной устойчивости ВИЧ исследуют нуклеотидную последовательность генов обратной транскриптазы (rev), протеазы (pro) и интегразы (int).
наверх
Недавно стал доступен класс препаратов, препятствующих присоединению вирусной частицы к клетке-мишени, путем воздействия на CCR5-корецептор. Первым зарегистрированным препаратом данного класса является Маравирок (Maraviroc).
Различные штаммы ВИЧ используют в качестве корецептора рецепторы CCR5 или CXCR4. Штаммы, использующие CCR5, называют RS-тропными, CXCR4 - Х4-тропными, варианты вируса использующие оба типа - R5/ Х4-тропными. Являясь CCR5-aнтaгoнистом, Маравирок действует эффективно только на CCR5-тропные вирусы.
Соответственно, перед включением Маравирока в состав антиретровирусной терапии необходимо определить тропизм вируса у пациента. За тропизм отвечает небольшой участок гена оболочки ВИЧ (env), который называется V3-петлей.
Информация для заказа:
| Название | Особенности | Исследуемые гены | Тестов | Кат.№ |
АмплиСенс®
HIV-Resist-Seq | содержит реагенты для экстракции РНК и ДНК;
содержит реагенты для проведения реакции секвенирования, адаптирован к секвенаторам Applied Biosystems (ABI)
| pro, rev | 50 | TM-V0-50-F-1-S |
| pro, rev, int | 50 | TM-V0-50-F-2-S |
| pro, rev, int, env | 50 | TM-V0-50-F-4-S |
содержит реагенты для экстракции РНК и ДНК;
не содержит реагенты для проведения реакции секвенирования;
адаптирован к секвенаторам Applied Biosystems (ABI) и Beckman Coulter
| pro, rev | 50 |
TM-V0-50-F-5 |
наверх
Выявление аллеля HLA B*5701 - единственное на сегодняшний день фармакогенетическое исследование, рекомендованное ВИЧ-инфицированным лицам; используется для прогноза развития реакции гиперчувствительности к абакавиру.
Абакавир – нуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы, применяемый с другими антиретровирусными препаратами для лечения ВИЧ-инфекции. Наибольшим недостатком абакавира, который ограничивает его использование, является возникновение реакции гиперчувствительности, которое возникает у 5–8% пациентов в течение первых 6 недель лечения. Симптомы гиперчувствительности к абакавиру неспецифичны и трудноотличимы от сопутствующей терапии, реакции на другие лекарственные средства или воспаления. В настоящий момент доказана связь между возникновением гиперчувствительности к абакавиру и наличием у пациента аллеля В*5701 главного комплекса гистосовместимости I-го класса. В настоящее время рекомендуется проведение тестирования пациента на наличие у него аллеля В*5701 при начале терапии вне зависимости от ее схемы. Набор реагентов АмплиСенс® Геноскрин HLA B*5701-FL позволяет выявлять аллель HLA B*5701 в образцах ДНК, выделенной из крови или буккального эпителия - соскоба эпителиальных клеток с внутренней стороны щеки.
Информация для заказа:
| Название | Особенности | Тестов | Кат. № |
| АмплиСенс® Геноскрин HLA B*5701-FL | содержит набор «РИБО-преп» и «Гемолитик» для выделения ДНК | 110 | TR-O2-(RG,iQ) |
| не содержит набор для выделения ДНК | 110 | R-O2-(RG,iQ) |
наверх
 Нормативные документы и публикации о ВИЧ>>
|
|
