ПЦР-диагностика холеры

Холера — острая инфекционная болезнь с диарейным синдромом, фекально-оральным механизмом заражения, пищевым, водным и контактно-бытовым путями распространения возбудителя.

Возбудителями холеры являются холерные вибрионы серогрупп О1 (классического и Эль-Тор биоваров) и О139. Токсигенные (ctxA+) холерные вибрионы обеих серогрупп вызывают заболевание холерой, склонное к эпидемическому и пандемическому распространению (это эпидемически значимые штаммы), нетоксигенные (ctxA-) - единичные или групповые заболевания холерой при общем источнике заражения. У нетоксигенных штаммов холерных вибрионов возможно присутствие отдельных генов патогенности, среди которых определенную значимость имеет ген tcpA, участвующий в процессе адгезии.

Характеристика генома холерных вибрионов молекулярно-биологическими методами широко используется для оценки эпидемической значимости выделенных штаммов и эпидемиологического анализа. Выявление генетических детерминант патогенности методом ПЦР выгодно отличается от классических методов не только высокой скоростью выполнения анализа и отсутствием необходимости выращивать холерные вибрионы в культуре, но и возможностью выявлять наличие гена холерного токсина даже у штаммов, не экспрессирующих этот токсин на достаточном уровне, но несущих ген ctxA.

Реагенты для выявления холеры

Набор реагентов АмплиСенс® Vibrio cholerae-FL предназначен для выявления ДНК холерных вибрионов, определения их принадлежности к серогруппам О1 и О139 и идентификации патогенных штаммов:

Биоматериалы: фекалии нативные, мазки со слизистой прямой кишки, рвотные массы, секционный материал, вода после предварительной фильтрации, смывы с объектов окружающей среды, пептонная вода после посева биологического материала или пищевых продуктов, культуры микроорганизмов.

Биоматериалы обеззараживают, добавляя к подготовленным образцам натрия мертиолят (приобретается отдельно) до концентрации 0,01 % с последующим прогреванием их при 56°С в течение 30 минут. После инкубации в лизирующем растворе из набора реагентов для экстракции ДНК при температуре 65 °С в течение 15 минут материал становится обеззараженным.

Для выполнения исследования необходимо также использовать набор реагентов для экстракции «ДНК-сорб-B». 

Нормативные документы

МУК 4.2.2218-07 Лабораторная диагностика холеры (Скачать)

Публикации

Разработка тест-систем на основе мультиплексной ПЦР для обнаружения эпидемически значимых холерных вибрионов (Читать)