Результаты испытаний препарата «Амплисенс HСV монитор - FRT»тест-системы для количественного определения рнк вируса гепатита С методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»

Результаты испытаний препарата «Амплисенс HСV монитор - FRT»тест-системы для количественного определения рнк вируса гепатита С методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени»

Проведены медицинские испытания тест-системы для количественного определения РНК вируса гепатита С методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени», разработанной ФГУН Центральным НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. В качестве препарата сравнения использовали тест-систему для количественного определения РНК вируса гепатита С «АмплиСенс HCV Монитор» с гибридизационно-ферментной детекцией производства ФГУН ЦНИИЭ.

Опытная группа была представлена образцами плазмы крови больных с заболеваниями различными формами вирусного гепатита С с положительными результатами ИФА на наличие антител к вирусу гепатита С ("Рекомби Бест anti-HCV" Вектор-Бест) и с положительными результатами на наличие РНК HCV в тест-системе "АмплиСенс HCV" - 39 образцов; образцы отраслевого стандартного образца ОСО РНК HCV сер. 1(ОСО 42-28-366-04П) с исходной концентрацией 105 копий/мл МЕ/мл и его разведениями – 18 образцов и образцы ОСО РНК HCV сер. 2 (42-28-366-06П) с исходной концентрацией 105 копий/мл МЕ/мл и его разведениями - 31 образец.

Контрольная группа была представлена образцами плазмы крови доноров с отрицательными результатами ИФА на наличие антител аHCV и отрицательными результатами ПЦР на наличие РНК HCV в тест-системе"АмплиСенс HCV" - 15 образцов.

Линейный диапазон определяемых величин препарата оценивали, используя ОСО РНК HСV (исходная концентрация и его разведения). Определение проводили дважды двумя операторами. Для построения графиков рассчитывали среднее количество РНК в пробах с повторными постановками. Построение графиков зависимости результата анализа (lg МЕ/мл) от lg разведения образца и расчет уравнения линии регрессии проводили с помощью программы Exel. Полученные результаты свидетельствуют о наличии линейной зависимости результата анализа от содержания РНК HСV в диапазоне  от 5х102 до 5х107 МЕ/мл.

Специфичность тест-системы подтвердили путем тестирования образцов плазмы крови доноров. Всего было исследовано 15 образцов плазмы донорской крови. Во всех 15 образцах получены отрицательные результаты: пороговое значение флуоресценции (Ct) исследуемых образцов не определяется, соответствующее Ct отрицательного контрольного образца К- также не определяется, Сt для ВКО < 28. Специфичность тест-системы - 100 %.

Воспроизводимость оценивали путем 8-кратного исследования образца, полученного при разведении ОСО РНК HCV, с концентрацией 5х102 МЕ/мл. По полученным результатам было расчитано стандартное отклонение (S) и коэффициент вариации (CV): S = 3,54x102 копий/мл, CV = 40 %. Изучена корреляция между результатами определения концентрации РНК HСV в образцах опытной группы с помощью исследуемой и референтной тест-систем: разница между результатами (Δ lg), полученными двумя тест-системами, не превышает 0,5 lg в 95 % случаев. В одном случае разница составила 0,84 lg. Коэффициент корреляции – 0,87.

Согласно международному консенсусу 2002 года эффективность противовирусной терапии оценивают по достоверному снижению вирусной нагрузки не менее чем на 2 lg через три месяца противовирусной терапии. С целью изучения возможности определения снижения вирусной нагрузки проведено исследование клинических образцов от 10 пациентов. Вирусную нагрузку определяли в образцах, полученных от пациентов до начала противовирусной терапии и через 3 месяца после начала лечения. У 8 из 10 пациентов вирусная нагрузка снизилась  более чем на 2 lg. У двух пациентов  наблюдалось снижение вирусной нагрузки  на 1,2 lg и 0,25 lg.

Таким образом, установлены следующие характеристики тест-системы: линейный диапазон находится в пределах от 500 до 50 000 000 МЕ/мл; специфичность препарата – 100 %, коэффициент вариации при исследовании образцов с концентрацией, близкой к детекционному порогу, составил 40 %. Результаты, полученные испытуемой и референтной тест-системами различаются не более, чем на 0,5 lg в 95 % случаев, коэффициент корреляции –0,87. Результаты испытаний позволили рекомендовать тест-систему к регистрации.