Заказать звонокЦифровая ПЦР - современная альтернатива ПЦР в реальном времени
Распечатать
Поделиться
Отличие ПЦР в реальном времени от цифровой
В отличие от стандартной количественной ПЦР, которая проходит в едином реакционном объеме, для проведения цифровой ПЦР пробу при помощи специального прибора случайным образом разделяют на большое количество изолированных микрокомпартментов, так называемых микрореакторов.
В каждый микрореактор попадают специфичные к ДНК-мишени праймеры и TaqMan- зонды или флуоресцентный краситель SYBR Green, а также целевые или фоновые фрагменты ДНК.
Далее, проводится термоциклирование образца и полимеразно-цепная реакция проходит только в тех ячейках, куда попала ДНК-мишень. Это приводит к возникновению в них флуоресцентного сигнала, который регистрируется при помощи специализированной системы – ридера.
Цифровая ПЦР с системой QuantStudio™ 3D от компании Thermo Fisher Scientific
Определение количества ДНК-мишени при помощи системы для проведения цифровой ПЦР QuantStudio™ 3D проводится без использования калибровочной кривой (без использования стандартов), вид которой сильно зависит от условий проведения ПЦР. Вследствие этого значительно возрастает устойчивость реакционной системы к ингибиторам ПЦР и воспроизводимость результатов.
Система для проведения цифровой ПЦР QuantStudio™ 3D позволяет детектировать единичные молекулы ДНК-мишени даже при низкой её концентрации в образце. Благодаря тому, что ПЦР проходит только в той ячейке, где есть ДНК-мишень, разбавление образца улучшает «чистоту» сигнала (увеличивается соотношение сигнал/шум).
Области применения цифровой ПЦР:
- обнаружение редких мутаций (от 0,025% до 0,01% представленности в образце);
- определение вариаций числа копий гена;
- обнаружение химеризма;
- чувствительная детекция уровня экспрессии генов, кодирующих белки и малые некодирующие РНК;
- абсолютное определение вирусной нагрузки.
Видеообзор технологии и областей применения цифровой ПЦР с системой QuantStudio™ 3D Digital PCR System (Thermo Fisher Scientific)
