АмплиСенс, АмплиПрайм

Фильтр

Категории

В чем может быть причина отсутствия ВКО (Внутреннего Контрольного Образца) или его выхода на поздних циклах в постановке?

Несоблюдение условия хранения ВКО заявленного в инструкции;
Погрешность в дозировании;
Ингибирование на этапе экстракции;
Неравномерное перемешивание ВКО.

В чем может быть причина сбоя калибраторов в количественной методике:

Несоблюдение условий хранения, заявленных в инструкции;
Погрешность в дозировании;
Неравномерное перемешивание.

В чем может быть причина появления неспецифических кривых сигнала по одному из каналов детекции?

Подсвет с канала на канал;
Неспецифическое накопление сигнала флуоресценции;
Низкая эффективность реакции;
Повышение фонового уровня сигнала;
Неисправность прибора.

По какой причине может отсутствовать накопление продукта амплификации?

Техническая неисправность оборудования;
В реакционной смеси отсутствует полимераза.
Ингибирование реакции

По какой причине не рассчитываются результаты постановки в макросе?

Из-за несоблюдения порядка обозначения для контрольных точек и образцов;
Из-за того, что не указаны значения для контрольных точек из вкладыша к набору реагентов.

Можно ли использовать для исследования биоматериал, который не указан в инструкции к ТС?

Нет, при использовании клинического материала, не указанного в инструкции, результаты ПЦР не подлежат корректной обработке.

Для чего необходимы контроли экстракции и амплификации: ВК, ОКО, ПКО, К-, К+, калибраторы?

ВК (внутренний контрольный образец) – контролирует экстракцию конкретного образца. При выходе значения Ct для ВКО за пределы диапазона, указанного во вкладыше, проба считается невалидной. Возможные причины – потери НК на экстракции, содержание в пробе ингибиторов.

ОКО – отрицательный контрольный образец. Контролирует возможную контаминацию на этапе экстракции.

ПКО – положительный контрольный образец. Контролирует эффективность экстракции специфической мишени

К- - отрицательный контроль амплификации. Контролирует чистоту приготовления ПЦР-смеси. Появление любого значения Ct в К- связано с контаминацией на этапе приготовления ПЦР-смеси.

К+ - положительный контроль амплификации. Контролирует работу набора реагентов. При выходе значений Ct для К+ за пределы диапазона, указанного во вкладыше, вероятны проблемы с прибором или используемым набором реагентов.

Что такое контроль качества в ПЦР-лаборатории?

В лаборатории, использующей МАНК в диагностических целях, проводят внутрилабораторный контроль качества проводимых исследований с периодичностью, зависящей от объема выполняемой работы и определяемой руководителем лаборатории, но не реже одного раза в квартал;
Лаборатория должна принимать участие, в установленном порядке, в мероприятиях (программах) по внешней оценке качества лабораторных исследований (ФСВОК и т.д.) по конкретным нозологическим формам не реже 1 раза в год;
Внутрилабораторный и внешний контроль качества лабораторных исследований осуществляют путем анализа шифрованных аттестованных контрольных панелей, содержащих "положительные" и "отрицательные" пробы;
При проведении внутрилабораторного контроля качества лабораторных исследований могут использоваться аттестованные на наличие аналита (его количества) панели производителей коммерческих наборов или внутрилабораторные аттестованные образцы, содержащие и не содержащие нуклеиновые кислоты конкретных возбудителей в различной концентрации, стабильные в условиях хранения.

Какие бывают виды контаминации?

Контаминация аналитом непосредственно – ДНК (реже РНК) вирусов, грибов, бактерий, человека и т.д. Одним из примеров аналитов, которые могут вызывать такую контаминацию это вирус гепатита В – вирусная нагрузка в образце может доходить до 10⁹ геномов в 1 мл плазмы;
Контаминация контрольными материалами;
Ампликонная контаминация – самая часто встречающаяся и самая сложная. Концентрация фрагментов ДНК после амплификации может достигать 10¹² фрагментов ДНК в мл, в то время как чувствительность метода ПЦР достигает 1-2 копий. Такая контаминация, вероятнее всего, может произойти в том случае, если пробирки после амплификации в термоциклере были открыты в чистой зоне лаборатории. Даже если визуально не видно следов разбрызгивания или протекания жидкости, открытые крышки пробирок после ПЦР с огромной вероятностью приведут к контаминации.

Контаминация тем вероятнее и тем сложнее, чем выше концентрация ДНК в образце, послужившего источником.

Использование дезинфицирующих средств для инактивации ампликонов?

В лаборатории проводят ежедневную влажную уборку в соответствии с п. 8.2 МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности»:

«Ежедневно в конце рабочего дня проводят текущую влажную уборку полов разрешенными к применению дезинфицирующими средствами.»

Порядок действий в случае контаминации описан в соответсвии с п. 8.9 МУ 1.3.2569-09 в приложении 7:

«6. Поверхности каждого участка вначале обрабатывают моющим раствором для удаления жировых загрязнений, после чего остатки моющего средства удаляются ветошью, смоченной водой.

7. Затем на поверхность наносят на 30 мин 0,2 %-й раствор ДП-2Т или аналогичные ему растворы, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке. Остатки дезинфицирующего средства тщательно удаляют ветошью, смоченной водой.»